د پولیمیریز سلسلې غبرګون) PCR (غبرګون د هرې برخې اصالحات کولی شي د محصول حاصلات او کیفیت ښه کولو یا د غبرګون ځانګړتیا او حساسیت ښه کولو له لارې، د پایلو کیفیت بدل کړي. هغه پیرامیټونه چې د پای پایلې اغیزه کوي یا فزیکي) لکه، تودوخه، د سایټ وختونه (یا کیمیاوي) یعنې د ساندلو تغیرات، د انزیم ډول ډول کارول (. لاندې لاندې کلیدي عوامل دي چې د PCR بریالیتوب تاثیر کوي.
01 د پاک لابراتوار شرایط
څرنګه چې د PCR د DNA د یو واحد انډول معلومولو توان لري، دا په لابراتوار کې د قیمتي شرایطو ساتل مهم دي. تل تازه تازه دستی واخیستل شی، د شیشلی شیش لوازماتو، نلونو او پایپټ تجهیزاتو او ویشلو حلونو څخه کار واخلئ، او د کار پیل کولو څخه دمخه د کار ساحه پاکه کړئ.
تل د کنترول غبرګونونه شامل دي، پرته له ډایپ اې این این او پرته انزیم، دا یقیني کړي چې پایلې یې د سم نمونې د پراخولو له امله ریښتیا دي.
ډیری خلک ډاډمن کوي چې د حل لاره حل کړي چې د ستونزې حل کولو اسانه اسانه کولو لپاره ندي ګډ شوي او ټاکل شوي پایپټونه ډیری وختونه د PCR لپاره ټاکل کیږي. DNase او RNase-free PCR tubes، Aerosol-resistant pipette tips او په خنده غسل کې کار کول د یووی رڼا سره هم د لارې کمولو الرې چارې دي.
02 کیمیاوی اجزاء
- له 18 څخه تر 24 اډو کې لرئ
- هیڅ ثانوي ساختماني نلري (د بیلګې په توګه د غاښونو غوږونه)
- د G / C او A / T جوڑو متوازن ویش لري
- په 3 فوټ پای کې یو بل سره بشپړ نه یاست
- د هوا د حرارت درجه لاندې د 5-10 درجو سیلکلیکونه) Tm (لرونکی وي، چې معمولا د 55 څخه 65 درجې سیلیکس
د دواړه پریمرانو لپاره Tm باید د غوره پایلو لپاره هم ورته وي.
03 د غبرګون مخلوط: سانچہ او پرائمز
د لومړنۍ لمړنۍ تمرکز 0.1 0.1 او 0.6 micromoles / L ترمنځ دي. د سانټیټ اندازه د DNA ډول (انسان، باکتریل، پلاسمید) پر بنسټ توپیر لري.
د ډیری ټیټ اندازو سره، د پایلو د ښه کولو لپاره نورې ستراتیژۍ شتون لري، لکه د چټکتیا شمیرې یا "ګرم پیل". تل د نوي پریزنټرونو معاینه د کنټرول مثبت مثبت غبرګون سره معاینه کړئ، دا یقیني کړئ چې دوی د خپل ځانګړي تجربې شرایطو الندې کار کوي.
د غبرګون مخلوط: انزیم فعالیت
د عکس العمل په مرکب کې د MGCl2 تسلسل کولی شي د PCR پایلې اغیزمن کړي او کولی شي په ډیرو سختو غبرګونونو کې مهم رول ولوبوي. د مګنییمیم سیمی د DNTPs سره حل شوی پیچلی پیچلی جوړوی تر څو اصلی فرعی سیسټم تولید کړی چی پالیمریز انزمی پیژنی.
د ټولو څلور DNTPs مساوي مقدار هم د پالیمیریز د غلطۍ شرح کمولو کې مرسته کوي. ځینې اضافي اضافې لکه بیتین، BSA، خنډونه، DMSO، glycerol، او pyrophosphatase کولی شي د انزیم مشخصیت یا د عکس العمل اغیزمنتوب اغیزمن کړي.
05 د تولیدویکیر ډول
کله چې د لابراتوار تجهیزاتو لپاره وپلورل شي، نو په ذهن کې یې وګورئ چې ترمیم ترمینځ یو شمیر نور دقیق، د مطلوب حرارت درجه ساتل کیږي.
دا یو هغه ساحه ده چې سستی سستی به په اوږدې مودې کې پیسې ورنکړي کله چې تاسو د اختلافي غبرګون سره مخ یا د لومړنیو توکیو کارولو ته اړتیا لرئ چې د حرارت د تودوخې محدود حد ته اړتیا لري.
د ټیټ دیوال شوي عکس العملونو ټیوبونه چې د ترمویکیکر دقیق برانډ په کارولو سره ډیزاین شوي تاسو یې کارولی شئ، د غبرګون د حرارت درجه ښه کولو کې هم مرسته کوي.
د سایټ سایټونه
د حاصلاتو زیاتیدل د هر 20 سایټونو د توزیع کولو وخت زیاتولو سره ترلاسه کیدی شي، ترڅو د لا ډیپلومات زیاتولو لپاره لږ انزیم تاوان ورکړي. عموما، له 40 څخه کم سایټونه د 10 سانټیټ څخه لږ کم انکشاف کولو لپاره کافی دی چې په پوره اندازه غلظت ته د ایتالیم برومایډ-پوټ شوي اراوسز جیل وګورئ.