د پروټین د پاکوالي کچه د پروتین په اراده پای کار پورې اړه لري.
د ځینو غوښتنلیکونو لپاره، یو خامه ایستنه کافی ده. په هرصورت، د نورو استعمالونو لپاره، لکه د خوړو او درملو په څیر، د پاکوالي لوړه کچه ته اړتیا ده. د دې پروټین د پاکولو میتودونو ته د رسیدو لپاره، په ځانګړي ډول د پاکولو د لړۍ په لړۍ کې کارول کیږي.
د پروټین پاکولو قدم هر کله د محصول کچه ضایع کیږي. نو له همدې امله د پروټین پاکولو یو مثالی ستراتیژي یو له هغو څخه ده چې په لږترلږه مرحلو کې ترټولو لوړ پاکوالي ته رسیدلی دی. د کارولو لپاره کوم ګامونه د اندازې، چارج، د حل کولو او د هدف پروټین نور خصوصیات. لاندې تخنیکونه د یو سایټوسولیک پروټین پاکولو لپاره خورا مناسب دي. د سایټوسولیک پروټین کمپنیو پاکول خورا پیچلي دي او معمولا د دې بیلابیلو طریقو غوښتنه کوي.
د پروټین پاکولو لپاره لومړی ګام
د انټراسیلر پاکولو لومړنی ګام (د حجرو دننه) پروټین د خام کان کیندنې چمتو کول دي.
استخراج به د سیل سایټوپلاسم څخه د پروټینونو پیچلي مرکب ولري، او ځینې نور macromolecules، Cofactors او غذايي توکي. خامه ایستنه کیدای شي د بیو ټیکنالوژۍ په ځینو غوښتنلیکونو کې کارول شي، که څه هم، پاکوالي یوه مسله ده، وروسته د پاکولو ګامونه باید تعقیب شي.
د خام پروټین ارقونه د حجرې لیزس لخوا تولید شوي سیلولر مبرز له مینځه وړل کیږي، کوم چې د کیمیاوي موادو او انزايمونو ، سون سونشن یا فرانسي پریس څخه کار اخستل کیږي. دا کثافات د سینټرافیګریشن لخوا لرې کیږي، او د سپرنتاټینټ ترلاسه کیږي. د اکریتریلر پروټینونو خام چمتو کول ممکن د سینټروجنګریشن له لارې د حجرو له لرې کولو سره ترلاسه شي.
د ځینو بایو ټیکنالوژیو غوښتنلیکونو لپاره، د تودوست وړ وړ انزیمونو لپاره غوښتنه شتون لري: انزیممونه چې کولی شي د تودوخی لوړ حرارت پرته برداشت کړي، او په داسې حال کې چې یو ځانګړي ځانګړي فعالیت ساتل کیږي. هغه ارګانیزمونه چې دوی تولیدوي کله ناکله د افرافوفیلز په نامه یادېږي. د تودوخی مقاومت لرونکي پروټین پاکولو لپاره اسانه لاره داده چې د نورو توتینونو په مخلوط کې د تودوخې له لارې، او حل حل کول) د دې لپاره چې د اړتیا وړ که ترمیمسټ انزیم اصلاح او یا ریزول شي. د منلو وړ پروټینونه کولی شي د سناتورورګینشن له لارې لیرې شي.
د منځنۍ تصفیې ګامونه
په تیرو کې، د خام کان کیندنې څخه د پروټین پاکولو لپاره یو عام دویم ګام د لوړې لوټرو ځواک) د مالګې حل حل (سره د حل په وسیله وه. په خامې کښت کې نیکیک اسیدونه کیدای شي د راټیټومیومین سلفیت یا پروامامین سلفیت سره جوړ شوي مجموعي مجموعو لخوا لیرې شي.
د پروټین سایټ عموما د امونیم سلفیت کارول د مالګې په توګه ترسره کیږي.
بیلابیل پروټین به د امونیم سلفیت په بیلابیلو تمرکزونو کې تعقیب شي . په عمومي توګه، د لوړ اکمالول وزن پروټین د امونیم سلفیت په ټیټ متمرکز کې اصالح کوي. د تودوخې ورننوت معمولا د پاک پاک پروټین ته لیږدول کیږي مګر کولی شي د نمونو په تمرکز کې د ځینو ناپاکو پروټینونو په مینځلو کې مرسته وکړي. په حل کې سالټونه د ډیزلیشن لخوا د پارسی سیل سیلز ټیوب کولو، فلز کولو، یا د جالو جلا کولو کروماتورۍ له الرې لیرې شوي.
د پرمختللي بیوټرو پروتوکولونو ډیری وختونه د ډیری سوداګریزو موجوداتو کټیو څخه ګټه اخلي چې د معیاري پروسیجرونو لپاره چمتو شوي حل چمتو کوي. د پروټین پاکولو ډیری وختونه د فلټرونو او چمتو کولو لپاره د جیل فلسشن کالمونو کارول کیږي. ټول هغه څه چې تاسو یې کوئ باید لارښوونې تعقیب کړئ او د حل لاره سمه حجم زیاته کړئ او د تازه ازموینې ټیوب کې د هغه وخت راټولولو په وخت کې د ټاکل شوي وخت انتظار وکړئ.
- د کروماتګرافیک طریقې کیدای شي د بنچ ټیټ پوسټونو یا د HPLC اتوماتیک وسیلو څخه کار واخلئ. د HPLC لخوا جلا کول کیدای شي د بیرته مرحلې، آون تبادله یا د اندازې خارج کولو طریقې، او د ډایډایډ سیر یا لیزر ټیکنالوژۍ لخوا کشف شوي نمونې لخوا ترسره شي.
پروټین د تصفیې لیدل او ارزونه
- بیرته راګرځیدونکی مرحله کروماترافی (RPC) پروټینونه د خپلو نسبتا هایډففوبیکیتونو پر بنسټ جلا کوي. دا تخنیک خورا خورا غوره دی خو د عضوي مصارفو کارولو ته اړتیا لري. ځینې پروټینونه په دايمي توګه د مصؤنتونو له الرې رد کیږي او د RPC په دوران کې به فعالیتونه له لاسه ورکړي. نو له همدې امله دا طریقه د ټولو غوښتنلیکونو لپاره سپارښتنه نده، په ځانګړي ډول که چیرې د فعالیت ساتلو لپاره د هدف پروټین لپاره ضروري وي.
- د کروماتورۍ عین تبادله د پروتین پراساس د پروټین جلا کولو ته اشاره کوي. کالمونه کیدی شي د انو د تبادلې یا د حوالې تبادلې لپاره چمتو شي. د انو د تبادلې کالمونه د سټیشن پړاو لري چې د مثبت پیسو سره لري چې د منفي تورونو پروتینونو سره مخ کوي. د کډوالو د تبادلې کالمونه ریورس، منفي اغېزه موټرې دي چې مثبت مثبت تور پروتین جذبوي. د هدف پروټینز الاتوالی د پی ایچ په بدل کې د pH بدله کولو سره ترسره کیږي، کوم چې د هر پروټین د چارج شوي فعال ګروپونو بدلون یا بې برخې کول دي.
- د اندازې خارج کول کولوماترافی (د جیل فلسینشن ) لوی لوی پروټینونه له کوچنیو څخه جلا کوي ځکه چې لوی لوی مالولونه د کرومیټریګراف کالم کې د کراس تړل شوي پولیمر له لارې چټک سفر کوي. لوی پروټینونه د پولیمر په pores کې نه راځي پداسې حال کې چې کوچني پروټینونه کوي، او د کروماتریژې د ستونځې له الرې یې د دوی د مستقیم مستقیم الرو له الرې سفر ته اوږد وخت نیسي. ایلیوټ د ټیوبونو په لړۍ کې راټول شوي چې پروتینونه د احتیاط په وخت کې ویشل کیږي. د جیل فلسینشن د پروټین نمونې تمرکز لپاره یو ګټور وسیله ده ځکه چې هدف هدف پروټین په وړو احتیاطي حجم کې راټول شوی و په پرتله چې په لومړي کالم کې اضافه شوی و. د فلټریشن ورته تخنیکونه کیدی شي د لوی کچې پروټین تولید په وخت کې د دوی د اغیزمنتیا له امله وکارول شي.
- انفرادي کرومیټرافیټ د "پالش کولو" یا پروټین د پاکولو پروسې بشپړولو لپاره خورا ګټور تخنیک دی. د کرومیټریګراف کالم کې موتیان د لرګیو سره تړلي دي چې په ځانګړي ډول د هدف پروتین سره تړاو لري. وروسته پروتین د کالم څخه لیرې شوي د حل کولو سره لرې وړیا لیګزونه لرې شوي. دا طریقه د نورو تخنیکونو په پرتله غوره پایلې او تر ټولو لوړ فعالیت وړاندې کوي.
- SDS-PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis دی، د SDS (سوډیم ډدیکیل سلفیت) په شتون کې ترسره شوي چې د پروټینونو سره یې یو لوی خالص منفي چارج وړاندې کوي. څرنګه چې د ټولو پروټینونو مساوي مساوي برابر دي، دا طریقه دوی تقریبا په بشپړه توګه د اندازې پراساس جلا کوي. د SDS-PAGE ډیری وخت په یوه لړۍ کې د هر پړاو وروسته وروسته پروتین آزموینې لپاره کارول کیږي. لکه څنګه چې ناپسندیدونکي پروټینونه په تدریجي ډول له مخلوط څخه لیرې کیږي، د SDS-PAGE په جیل کې لیدل شویو بکسونو شمیر کم شوی، تر هغه چې یوازې یو یو بوی د غوښتل شوي پروتین استازیتوب کوي.
- Immunoblotting د پروتین نظریاتو تخنیک دی چې د انفرادی کرومیټرافیټ سره په مجموع کې کارول کیږي. د ځانګړو پروټین لپاره انتي بیوډونه د انفرادي کرومیټریګراف کالم کې د لیګز په توګه کارول کیږي. د هدف پروټین په کالم کې ساتل کیږي، وروسته بیا د کالم رینګ کول د مالګې حل یا نورو ایجنټونو سره. انتيبيوډونه چې د راډيوټيکي يا رنګ رنګ ليبلونو سره تړاو لري د هدف پروټين په کشف کې مرسته کله چې دا د مخلوط څخه پاتې شي.
سرچینې:
زبای جی. 1988. بایو کیمیا، دوهم نمبر. ماکلمین پبلشنگ کمپنی، نیویارک، نیویارک، د متحده ایاالتو.
امرسام فاررمیا بایوټیټ. 1999. د پروټوین پاکولو دستګاه، ایډیشن AB. امرسام فارمایا بائیوٹیک انکارپورټ نیو جرسی، امریکا. http://www.biochem.uiowa.edu/donelson/Database/20items/protein_purification_handbook.pdf.