د PCR پیژندل او جین انکشاف څه پیرود باید د DNA سره وکړي؟
د پولیمیریز چینل غبرګون ( PCR ) د جین د ډیرو کاپي کولو لپاره د انوګولیک جینیکیک تخنیک دی او د جین د ترتیب لړۍ هم برخه لري.
د پولې غبرګون کار پولیمیمیز څنګه څنګه کوي؟
د جین کاپي د DNA یو نمونه کارول کیږي، او ټیکنالوژي دومره ښه ده چې د نمونو کې موندل شوي جین د یو یو کاپی څخه زیات نقلونه جوړ کړي. د ملیونونو کاپیسا جوړولو لپاره د جین تمدید کول، د جین د ترتیبونو کشف او پیژندلو ته د DNA د ټوټې د اندازې (+ یا -) په اساس د بصري تخنیکونو په کارولو سره اجازه ورکوي.
د کنترول شوي شرایطو لاندې، د DNA کوچنۍ برخې د انزیمونو لخوا جوړېږي چې د DNA پالیمرونو په نوم یاديږي، دا د DNA ډمینیک ډینکسینکولوټس (DNTPs) د "سانچے" په نوم پیژندل کیږي. حتی د DNA کوچنۍ ټوټې چې "primers" نومېږي د پالیمیریز لپاره د پیل شوي ټکي په توګه کارول کیږي. Primers د وړو انسانانو جوړ شوي ټوټې دي چې د DNA (oligomers)، معمولا د 15 څخه تر 30 نیټوټیوټایډونو پورې اوږد وي. دا د جین د پرله پسې په وروستۍ پایلې کې د DNA لنډیزونو پوهیدلو یا اټکل کولو له الرې جوړیږي. د PCR په جریان کې، DNA ترتیب شوی دی او دوه ګونی جوړښت جلا کوي. کولی شو، لومړني ټیمونه سانسور ته ځي (د اینینولین په نوم یادیږي) او د پالیسر لپاره د ځای په ځای کولو لپاره ځای جوړ کړئ.
د PCR تخنیک
د پولیمیریز چینل غبرګون (PCR) د ترمامفیلز او ترمامیلویلیک پالیمریز انزیمز په واسطه ممکنه شوی و (انزیمونه چې د تودوخی لوړه حرارت څخه وروسته د ساختماني بشپړتیا او فعالیتونو ساتل).
هغه ګامونه چې د PCR په تخنیک کې شامل دي په الندې ډول دي:
- A مرکب رامنځته شوی، د DNA نمونه، پالیمریز انزیم، پریمټران، او د DNTPs د غوره شوي پاملرنې سره. د انزیم له مینځه وړلو پرته د حرارت تودوخه کولو توان لري چې د 94 درجې سیلسیس په درجه کې د DNA نمونې د دوه ګونی هیلکس رد کولو لپاره اجازه ورکړي.
- د منازعې وروسته، نمونه د منځنۍ درجې حد ته نژدې، 54 درجو ته رسیږي، چې د لومړیو مینځلو انډول (پابندۍ) د واحد ډنډ شوي DNA ټیمونو ته آسانتیاوي کوي.
- د دې سیسټم په دریم پړاو کې، نمونه د 72 درجې ته، د تاک ډي این پالیمریزم لپاره د تودوخی درجه اخیستل د لیږد لپاره. د تغیر په جریان کې، د DNA پالیمرډ د DNA اصلي اصل ډنډ د یوې ټیم په توګه کاروي ترڅو د هر پریمر درې برخې ته بشپړونکي DNTPs اضافه کړي او د ګټو جین په سیمه کې د دوه اړخیز شوي شوي DNA یوه برخه چمتو کړي.
- هغه پریزینټرونه چې د DNA ترتیبونو ته رنګ شوي دي کوم چې سم میچ نه وي، په 72 درجو کې انفجار ندي، ځکه چې د جین جین ته محدودیت محدودوي.
د منفي کولو، تنفس کولو او لیږد پروسه دا یو څو (30 - 40) ځلې تکراروي، په دې توګه په مخلوط کې د غوښتل شوي جین نسخې نسخې ډیروي. که څه هم دا پروسه په سمه توگه ترسره شوې وي، نمونې کولی شي د پروتوکول وړ Thermocycler کې چمتو او انسجام شي، اوس په معمولي ډیری مالیکول لابراتوار کې، او د PCR بشپړ بشپړ غبرګون 3-4 ساعته ترسره کیدی شي.
د منلو وړ هر ګام د مخکینۍ چټک تغیر بهیر ودروي، په دې توګه د DNA نوې قطع کول او دا د غوښتل شوي جین اندازې اندازه ته ساتل.
د اوږدې مودې دورې دوره کیدای شي اوږده یا لږه د ګټو د اندازې پورې اړه ولري، مګر بالاخره، د PCR د بار بار چلوونکي، اکثره ټیکنالوژي به یوازې د ګټو د جین اندازه پورې محدود وي، لکه څنګه چې دوی به د لومړنیو دواړو تولیداتو څخه تولید شي.
د PCR بریالی بریالیتوب لپاره ډیری بیلابیل عوامل شتون لري چې پایلو ته وده ورکول کیدی شي. د PCR محصول د شتون لپاره ازموینې تر ټولو تر ټولو پراخه کارول د ارااروز جیل الیکروفوریسس دی . کوم چې د اندازې او چارج په اساس د DNA ټوټو جلا کولو لپاره کارول کیږي. وروسته ټوټې د رنګونو یا راډیوزونوونو په کارولو سره لیدل کیږي.
ارتقاء
د PCR د موندلو راهیسې، د اصلي ټیک څخه پرته DNA پالیمرونه کشف شوي. ځینې یې په لوړه درجه کې د "ثبوت کولو" ظرفیت لري یا د لوړ ثبات لرونکي دي، په دې توګه د PCR مشخصیت ته وده ورکوي او د غلط DNTP د ننوتنې څخه غلطی کموي.
د PCR ځینې توپیرونه د ځانګړي غوښتنلیکونو لپاره ډیزاین شوي او اوس په منظم ډول د مالیکول جینیتي لابراتوارونو کې کارول کیږي. ځینې یې د Real-Time PCR او Reverse-Transcriptase PCR دي. د PCR موندنه د DNA ترتیب کولو، د DNA ګوتو چاپ کولو او نورو مالیکولیک تخنیکونو ته وده ورکوي.